我公司凭借多年来的销售经验和丰富的产品知识得到了广大客户的信赖与支持。今天起,我公司将不定期更新ELISA试剂盒实验技巧,供参考。上海沪鼎ELISA试剂盒让您赢在起跑线!
1. 标本及采集、贮运因素
① 严重溶血:以HRP为标记的ELISA测定中,残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性,催化底物显色造成假阳性;
② 混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净
③ 如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应;
④ 标本凝固不全,有时为了争取时间快速检测,常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清,使血清中仍残留部分纤维蛋白原,在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性结果;
⑤ 采血试管洗涤不彻底、反复使用易交叉污染
⑥ 塑料试管能吸附抗原物质 ,样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。
血清标本宜在新鲜时检测,严重溶血标本禁用。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合,使间接法的 试剂 本底加深。超过一周测定的需-20℃保存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使 抗体 效价跌落,所以测 抗体 的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。
2. 之操作技术的影响
① 应保证清洁,整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。从而提高检测的特异性。并得到更准确、可靠的实验结果。
② 合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。
③ 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
④ 用洗板机洗板时,保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干:还要防止针口有纤维蛋白或异物,这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。
⑤ 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
希望以上的ELISA试剂盒实验技巧内容能够给您带来实质上的帮助,更多相关试剂盒的资料详情欢迎您来电咨询。